目前，核酸篩檢系統(tǒng)(Nucleic Acids Testing，NAT)已廣泛用于血制品常規(guī)病原體(乙肝、丙肝、艾滋、梅毒)的核酸檢測(cè)，極大降低了相關(guān)疾病的輸血傳播。但是，在輸血感染性風(fēng)險(xiǎn)中，血小板的細(xì)菌污染及相關(guān)敗血癥性輸血反應(yīng)仍是棘手的問(wèn)題。將核酸篩檢技術(shù)用于細(xì)菌污染檢測(cè)還有不少困難，包括：1、細(xì)菌污染不像特定病原體，沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)品;2、缺少合適的內(nèi)參質(zhì)控排除假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果;3、核酸擴(kuò)增聚合酶(Taq)大多是細(xì)菌來(lái)源，帶有痕量的細(xì)菌核酸成分。

　　近期，中國(guó)科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所血液免疫學(xué)研究中心提出一種雙重?zé)晒舛縋CR方法可提高細(xì)菌污染檢測(cè)的可靠性：設(shè)計(jì)一條人工核酸序列(IRC)作為內(nèi)參，其特點(diǎn)是IRC與靶基因共用同一對(duì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，分別用不同熒光探針進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)精確控制IRC分子數(shù)達(dá)到陽(yáng)性檢出限，以其Ct(i)值作為閾值，只有樣本檢測(cè)的Ct(s)值小于或等于Ct(i)時(shí)，檢測(cè)結(jié)果才可認(rèn)定為陽(yáng)性。一種雙樣本混合的t測(cè)驗(yàn)(two samples pooled t-test)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法可用于幫助判斷兩個(gè)Ct值的大小。IRC還可以包裝成噬菌體，用于監(jiān)控核酸樣本提取過(guò)程。

　　此外，該雙重?zé)晒舛縋CR方法可通過(guò)分別檢測(cè)細(xì)菌的DNA(脫氧核糖核酸)與RNA(核糖核酸)，計(jì)算不同Ct的比值，能判斷細(xì)菌是處于生長(zhǎng)繁殖期或者已經(jīng)是死菌，從而幫助判斷血制品滅活的效果。該方法不僅能用于血制品細(xì)菌污染檢測(cè)，理論上也能開(kāi)發(fā)成其他外源基因核酸定量檢測(cè)的有效方法。

　　圖-1、IRC雙重?zé)晒舛縋CR原理圖

　　圖-2、IRC雙重?zé)晒舛縋CR性能測(cè)試