苯在各行業被廣泛使用，制鞋和箱包工業中大量使用苯或含苯的溶劑和黏膠劑，在我國尚有此類企業存在空氣苯嚴重超標的情況。長期以來，對職業苯接觸者進行暴露評價一直采用作業場所的環境監測。近年來，發達國家逐步采用生物監測技術檢測苯接觸的內暴露指標苯巰基尿酸(SPMA)，并將生物監測與環境監測相結合，全面評價苯作業工人的個體接觸水平。我國至今尚未開展對職業接觸苯的生物限值及其檢測方法的研究，制定該標準有利于對苯作業者職業暴露水平的進行客觀評價。

　　二、標準使用范圍

　　本標準規定了尿中苯巰基尿酸濃度的檢測方法，適用于職業接觸苯工人尿中苯巰基尿酸濃度的測定。尿中苯巰基尿酸(SPMA)與苯接觸者存在良好相關性，是低濃度苯接觸特異和敏感的生物標志物。目前國外研究機構主要采用高效液相色譜法(HPLC)、液質聯用(LC-MS、LC-MS/MS)、氣相色譜法(GC)、氣質聯用(GC-MS)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)等方法檢測尿中SPMA。HPLC法是各國職業衛生機構進行生物監測的常用方法。目前國內HPLC儀基本普及，利于其作為職業苯接觸尿中SPMA檢測方法的應用。本法所用儀器在基層單位已普及，方法前處理簡單易操作，樣品采集、運輸、保存方便，色譜操作易于掌握，因此本方法便于推廣應用。

　　三、標準制定的方法和依據

　　本方法原理是尿中苯巰基尿酸(S-phenylmercapturic acid, SPMA)經氯仿∶異丙醇(5∶1，v/v)液-液萃取后，經ODS柱分離，紫外檢測器檢測，以SPMA峰保留時間定性，峰高或峰面積定量。該方法選擇乙腈-0.3%甲酸(25∶75，v/v)為流動相，0.3%甲酸可使SPMA色譜峰保留時間短，而且出峰附近沒有雜質峰干擾。對SPMA全離子峰(掃描范圍：100-300 m/z)可見SPMA分子離子峰([M-H]— m/z238)和一個碎片峰(m/z109)，其中[M-H]—m/z238為基峰，將其作為定量分析檢測的離子。該方法最低檢測限為10µg/L;線性范圍為10～320 µg/L。應用該方法對55名低濃度苯作業者的現場研究表明，個體接苯濃度的TWA范圍為0.71～32.17mg/m3，尿中SPMA濃度范圍為10～924µg/L，可滿足10ppm以下苯接觸人群生物監測的需要，特別對我國苯作業場所職業接觸限值TWA =6mg/m3內的人群可進行有效生物監測與評價。

　　本方法用于測定尿中SPMA不足之處是保留時間較長，檢測靈敏度較低，但仍可定量區分職業與非職業苯接觸。本方法選用氯仿∶異丙醇(5∶1，v/v)萃取，實驗表明混合溶劑萃取效率高。流動相選用乙腈作為流動相A，乙腈-甲醇-三乙胺(磷酸調節PH)為流動相B，采用梯度洗脫以縮短分析檢測時間。柱溫箱溫度設置在35℃時，尿樣中樣品峰周圍的雜質峰對SPMA出峰的影響最小，色譜峰分離較完全。方法選擇205nm波長作為檢測波長，可保證在基線平穩的狀態下，既降低背景干擾、又提高檢測的靈敏度。尿液PH對SPMA提取效果影響大，Paci[7]將尿樣先加強酸后加堿液調節適宜pH值后用有機溶劑提取，其機制是尿中SPMA前體在酸性條件下可水解為SPMA;實驗中發現尿樣pH在1～2時，SPMA的提取回收率較高。

　　四、標準使用的說明

　　本方法樣品進行前處理時，需要調節尿樣使pH<2時，這時的SPMA的提取回收率較高。在實驗過程中，在流動相B中，當調節三乙胺溶液的pH=2.16時，SPMA色譜峰的分離效果較好。將柱溫箱的溫度設置在35℃時，尿樣中樣品峰周圍的雜質峰對SPMA出峰的影響最小。在低濃度苯接觸時吸煙可能存在影響，采樣前一天接觸者應避免吸煙。需要注意的是，在中、高濃度的苯接觸時，班后反-反式粘糠酸(ttMA)與空氣苯濃度的相關性優于苯巰基尿酸(SPMA)。建議在接苯濃度5ppm以下時可首選尿SPMA為生物監測指標，在5ppm-15ppm首選尿ttMA，在15ppm以上時兩項指標均可選擇。